天狼影视

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冷冻技术在树舌干燥中的应用.pdf

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冷冻 技术 干燥 中的 应用
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摘要
申请专利号:

CN201410204826.X

申请日:

20140515

公开号:

CN103977042A

公开日:

20140813

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:
IPC分类号: A61K36/074,A61P35/00 主分类号: A61K36/074,A61P35/00
申请人: 济南康众医药科技开发有限公司
发明人: 刘圣梅,马玉奎,郭庆华,冯立娟,丁桂丽
地址: 250014 山东省济南市历下区科院路19号山东省科学院西楼4号
优先权: CN201410204826A
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

天狼影视CN201410204826.X

授权公告号:

法律状态公告日:

法律状态类型:

摘要

本发明涉及冷冻技术在树舌干燥中的应用,取新采收的树舌,冷冻,堆置2-5天,干燥,制备的树舌,主要有效成分多糖含量高,抗癌活性强。

权利要求书

天狼影视1. 冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:取新采收的树舌,冷冻,堆置2-5天,干燥。2.根据权利要求1的冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:冷冻是冷冻至冻结。3.根据权利要求1的冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:冷冻是冷冻至-5℃以下冻结。4.根据权利要求1的冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:干燥是堆置后晒干或烘干或晾干。

说明书

发明领域

天狼影视本发明涉及药品制法,特别涉及冷冻技术在树舌干燥中的应用,属医药技术领域。

背景技术

树舌(Ganodermaapplanatum(Pers.)Pat.)为担子菌多孔菌纲目树舌科树舌属真菌。其别名为赤色老母菌、扁树舌、扁木树舌、扁菌、扁芝、平盖树舌、白斑腐菌及皂角菌,民间俗称为“老牛肝”。树舌性平,气微,味微苦,具清热、解毒、止痛、抗癌之功效。

天狼影视现有技术的采收与加工方法为,全年采收,阴干或在40~50℃烘干。

发明内容

天狼影视本发明的目的是提供一种树舌干燥的新方法,该方法干燥的树舌,主要有效成分多糖含量高,抗癌活性强。

本发明是这样实现的:

冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:取新采收的树舌,冷冻,在阴湿处堆置2-5天,干燥。

天狼影视本发明的冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:冷冻是冷冻至冻结。

本发明的冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:冷冻是冷冻至-5℃以下冻结。

天狼影视本发明的冷冻技术在树舌干燥中的应用,其特征在于:干燥是堆置后晒干或烘干或晾干。

天狼影视本发明的冷冻至零下某℃,是在该零下某℃冷冻至冻结。

天狼影视至此完成了本发明,按本发明的干燥方法制备的树舌,主要有效成分多糖含量高,抗癌活性强。

下面通过试验例进一步说明本发明的有益之处,试验例旨在进一步说明本发明的有益之处,而非对本发明的限制。

天狼影视将同一批新采收的树舌,去除杂质,按以下方法进行加工。

天狼影视1)晾干:阴凉通风处,摊开晾干;

2)晒干:晒干;

天狼影视3)烘干:50℃以下烘干;

天狼影视4)冷冻堆置烘干:冷冻至-5℃至冻结,在阴湿处堆置3天,50℃以下烘干。

一、不同方法干燥的树舌多糖含量比较

天狼影视对照品溶液的制备:取葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。

天狼影视标准曲线的制备:分别精密量取对照品溶液0.2ml、0.4m1、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml,置10ml具塞试管中,加水至2.0ml,精密加入硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g,加80%的硫酸溶液100ml使溶解,摇匀)6ml,摇匀,置水浴中加热15分钟,取出,放人冰浴中冷却15分钟,以相应的试剂为空白,照《中国药典》紫外-可见分光光度法,在625nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。

供试品溶液的制备:取各样品粉末约2g,精密称定,置索氏提取器中,加水90ml,电加热器加热回流提取至提取液无色,提取液转移至100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀.精密量取10ml,加入乙醇150ml,摇匀,4℃放置12小时,取出,离心,倾去上清液,沉淀加水溶解,转移至50ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

测定法:精密量取供试品溶液2ml,置10ml具塞试管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg),计算,即得。

按干燥品计算,含树舌多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计,结果见表1。

表1 不同方法干燥树舌多糖含量(%)

干燥方法 晾干 晒干 烘干 冷冻堆置烘干 含量(%) 4.26 4.25 4.25 6.73

由表1看出,树舌“冷冻堆置后干燥”,多糖含量明显高于“晾干”、“晒干”和“烘干”。

二、不同方法干燥的树舌抗人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562试验。

天狼影视1、制备树舌提取物  分别取不同方法干燥的树舌粉碎,各加水煎煮两次,第一次加水8倍量,煎煮2小时,第二次加水8倍量,煎煮1小时,合并药液,药液滤过,取滤液,浓缩至相对密度为1.10(60℃)时,加入乙醇使含醇量达到75%,沉淀,静置36小时,吸取上清液,回收乙醇,浓缩,干燥,粉碎,得不同方法干燥的树舌提取物。

2、肿瘤细胞株 人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562,用RPMI-1649培养液, 37℃,5%CO2,相对湿度100%培养,贴壁细胞0.25%胰蛋白酶消化传代。

3、方法  MTT比色法测定提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。取对数生长期细胞,用新鲜的RPMI-1640培养液配制成细胞悬液,悬浮细胞1×105个/ml贴壁细胞0.8×105个/ml。悬浮细胞分别加入不同浓度实验药物后接种于96孔培养板中;贴壁细胞先接种于96孔培养板中,每孔90μl24h后分别加入不同浓度实验药物。终体积为每孔100μl且每组设3个平行孔,共设4组:受试药组T(培养液+细胞悬液+不同浓度受试药)、阴性对照组N(培养液+细胞悬液)、药物颜色对照组TC(培养液+不同浓度受试药)、空白对照组B(培养液+生理盐水)。受试药浓度依次为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml。置37℃,5%CO2培养箱中培养72h后,向每孔加入MTT溶液10μl震荡混匀后,继续培养4h,加入SDS90μl终止培养,37℃过夜,然后室温下在微量振荡器上震荡10min,酶标仪测定570nm波长处的吸光度(OD值),实验重复3次。

天狼影视按以下公式计算生长抑制率:

天狼影视生长抑制率(%)=(N组OD均值-B组OD均值)—(T组OD均值-TC组OD均值)/N组OD均值-B组OD均值×100%。

4、不同提取物对人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562的抑制率结果见表2、表3、表4。

表2  对SPCA-1的抑制率结果

抑制率(%) 10(μg/ml) 30(μg/ml) 50(μg/ml) 晾干  47.43 58.36 67.11 晒干 47.42 58.37 67.12 烘干  47.42 58.35 67.12 冷冻堆置烘干 53.27 73.42 81.44

表3  对HepG2的抑制率结果

抑制率(%) 10(μg/ml) 30(μg/ml) 50(μg/ml) 晾干  46.72 56.54 65.57 晒干 46.41 56.51 65.58 烘干  46.34 56.53 65.54 冷冻堆置烘干 57.61 73.37 86.18

表4  对K562的抑制率结果

天狼影视 抑制率(%) 10(μg/ml) 30(μg/ml) 50(μg/ml) 晾干  53.28 66.51 71.62 晒干 53.27 66.52 71.60 烘干  53.26 66.50 71.56 冷冻堆置烘干 61.73 74.35 80.47

结果表明,不同方法干燥的树舌对SPCA-1、HepG2、K562细胞的增殖均有抑制作用,其中,冷冻堆置烘干疗效最好。

具体实施方式

实施例1

取新采收的树舌,置冻干机内,冷冻至-5℃至冻结,阴湿处堆置2天,晾干。

实施例2

天狼影视取新采收的树舌,置冻干机内,冷冻至-10℃,在阴湿处堆置3天,晒干。

实施例3

取新采收的树舌,置冻干机内,冷冻至-20℃,在阴凉处堆置4天,烘干。

实施例4

天狼影视取新采收的树舌,置冻干机内,冷冻至-32℃至冻结,在室外堆置3天,烘干。

实施例6

天狼影视取新采收的树舌,置冻干机内,冷冻至-15℃,在室内堆置5天,晒干。

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